1. 氨基化及乙酰化
如果合成多肽為蛋白質(zhì)的內(nèi)部序列,通過N端乙?;?/font>C端氨基化可以去除多肽電荷使其更趨向于蛋白質(zhì)的自然結(jié)構(gòu),同時(shí)增強(qiáng)了多肽對(duì)外肽酶的抵抗力。
2. 生物素及FITC標(biāo)記
FITC是熒光標(biāo)記的活性前體。為了有效的標(biāo)記N端,可在多肽的N端和熒光基團(tuán)之間插入七原子的胺己酸酯間隔結(jié)構(gòu)(NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH);在C端進(jìn)行生物素標(biāo)記時(shí),常在其末端加上一個(gè)賴氨酸殘基,生物素被連接到賴氨酸側(cè)鏈,同時(shí)賴氨酸的的正電荷也被去除。
3. 多種二硫鍵修飾
在半殘基間制作二硫鍵可以實(shí)現(xiàn)多肽環(huán)狀化,但由于二硫鍵是隨機(jī)形成的,因此對(duì)于含多個(gè)半殘基的多肽來說,這是個(gè)挑戰(zhàn)。金斯瑞可在半指定的位置構(gòu)建二硫鍵,能實(shí)現(xiàn)一條多肽內(nèi)導(dǎo)入三個(gè)二硫鍵修飾。
4. 多種磷酸化
多肽磷酸化可以幫助研究磷酸化對(duì)多肽和蛋白結(jié)構(gòu)的影響以及蛋白激酶的作用機(jī)理,金斯瑞已經(jīng)成功地為客戶合成了大量的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸等磷酸化多肽。對(duì)于含有多個(gè)羥基氨基酸的多肽,可以通過交叉檢測(cè)或Fmoc檢測(cè)來選擇、確定多肽的磷酸化。
5. KLH, BSA,OVA
多肽抗原由于太小而不能產(chǎn)生顯著的免疫反應(yīng),因此需要將多肽抗原偶聯(lián)到BSA、OVA、KLH等較大的蛋白載體上。KLH由于在ELISA或Western blotting檢測(cè)中沒有抑制作用從而不影響檢測(cè)結(jié)果。常用的偶聯(lián)原理是順丁烯二酰亞胺理論,即將多肽中的半殘基與載體蛋白偶聯(lián)。因此合成抗原多肽時(shí),在其N端或C端添加一個(gè)半殘基有利于多肽與載體蛋白的偶聯(lián)。
注:KLH是一種很大的凝聚蛋白(MW = 4*105 to 1*107),由于它特殊的大小及結(jié)構(gòu),它在水中的溶解度不高,常常需要采取一些方法解決,但這并不影響免疫原性,免疫時(shí)常使用混合溶解的方法。
6. 修飾
修飾是將非離子的、無毒的、生物體不排斥的及高親水性的聚合體,通過化學(xué)方法偶聯(lián)到大分子上(蛋白質(zhì)、多肽等等)。修飾的大分子由于溶解性(主要指疏水性藥物)及生物利用率的增高,寄主內(nèi)小免疫反應(yīng)的抗原偽裝,清除率降低循環(huán)時(shí)間延長,從而提高了治療能力。
7. 同位素標(biāo)記
為了進(jìn)行核磁共振實(shí)驗(yàn),我們將多肽標(biāo)記穩(wěn)定的非放射性的同位素。標(biāo)記2H、15N、13C、或 15N 及 13C同時(shí)標(biāo)記的多肽合成后便于檢測(cè)。如果您需要標(biāo)記修飾,請(qǐng)?zhí)峁┠男蛄屑皹?biāo)記需求。
8. 復(fù)合抗原肽修飾
多抗原肽(Multiple-Antigen peptide, MAP)是生產(chǎn)高效價(jià)的抗多肽抗體和多肽疫苗的一種有效方法。多重抗原肽以賴氨酸的a-或e-基團(tuán)形成主鏈,以多拷貝的肽抗原作外表層的分枝狀合成多肽。根據(jù)賴氨酸的數(shù)目,可以合成不同數(shù)目側(cè)鏈的多抗原肽,這樣不必將抗原偶聯(lián)到載體蛋白質(zhì)便能產(chǎn)生高滴度、高親和力的抗體。
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